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2024-01-314181 次浏览
基质胶不会用?Q&A一文速览

一文速览

GelNest™ 基质胶

-常见问题与解析-


实验测试

细胞培养测试


GelNest™基质胶是由小鼠肿瘤组织中提取的基底膜成分制备而成,包含的主要成分有层粘连蛋白、IV型胶原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。这些成分可以提供细胞黏附、分化和增殖所需的支持和信号,同时也可以模拟生理环境中基底膜的特性,提高细胞培养的成功率和效果。

除了基底膜成分,GelNest™基质胶中还富含多种生长因子。这些生长因子可以促进细胞分化、增殖和迁移,从而进一步模拟生理环境中的细胞信号通路和互动。GelNest™基质胶具有广泛的应用前景,特别是在组织工程、细胞培养和研究等方面,可被用于类器官培养、干细胞分化、血管生成、迁移或侵袭和体内肿瘤发生等研究。



常见Q&A






1.GelNest™高浓度基质胶用于哪些实验?


GelNest™高浓度基质胶可适用于体内应用研究,如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使GelNest™基质胶注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子的原位保持,便于用于原位分析和/或以后的切除。



2.GelNest™基质胶包装瓶的材质是什么?


GelNest™基质胶选用AccureVial®COP 瓶进行包装运输。环烯烃聚合物(COP)瓶作为中硼硅玻璃的替代品,具有极高的设计灵活性,其不易破碎的特点,也降低了物流运输成本。

COP瓶优势:

★可耐受-196℃低温储存;

★较玻璃材质而言不易破碎;

★低蛋白吸附性;

★可耐受PH值>10的溶液,不易产生脱片,对基质胶进行安全性保护。



3.如何将GelNest™基质胶用于3D培养?怎样制作3D胶?需要将细胞嵌入到GelNest™基质胶中吗?


GelNest™高浓度基质胶可适用于体内应用研究,如制备厚层包被用于3D细胞培养。细胞可以嵌在GelNest™基质胶中或者接种在GelNest™基质胶表面(覆盖法)。



4.使用GelNest™基质胶时,移液器吸头和离心管需要预冷吗?


是的。因为GelNest™基质胶在高于10℃的条件下即会开始成胶,我们推荐操作基质胶时使用预冷的移液管、吸头和离心管。



5.GelNest™基质胶会快速聚合吗?


GelNest™基质胶在10℃至35℃时会快速聚合成胶。



6.什么情况下,需要使用无酚红GelNest™基质胶?


对于涉及颜色检测的实验,推荐使用无酚红GelNest™基质胶,如使用荧光染料或Drabkins法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养,也需使用无酚红GelNest™基质胶。

此外,酚红和非甾体雌激素结构类似,有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。



7.如何从GelNest™基质胶中收获细胞?


推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在GelNest™基质胶中的细胞。中性蛋白酶相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液,不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞,使用中性蛋白酶不会产生损伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。

对于代谢研究和RNA抽提,建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收集。因为GelNest™基质胶中含有痕量的RNA,进行RNA分析时,应设一个GelNest™基质胶(不接种细胞)的对照组。

其它从GelNest™基质胶中收获细胞的方法:降低温度至4℃-6℃使GelNest™基质胶解聚,需要一定的时间并且仅适合一部分应用。



8.GelNest™基质胶包被过的培养皿可以储存多长时间呢?


包被过的培养皿最好当天使用,具体情况取决于实验目的。

需要保存的情况下,可在37°C培养箱中最多存放7天。保存时GelNest™基质胶表面需要使用无血清培养基均匀覆盖,保持湿润。



9.哪些情况下应该选用薄胶?什么时候用厚胶呢?3D培养有哪些应用?


薄胶主要用于辅助细胞贴壁,有利于细胞增殖。如原代细胞培养,需要一层薄薄的蛋白层辅助,就可以选用薄胶。

厚胶主要用于3D细胞培养,如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构(RingAssay),以及进行细胞侵袭实验等。3D细胞培养实验,主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构,如生物组织等。



10.进行内皮管形成实验,应该选用多大浓度的GelNest™基质胶呢?


进行该实验,GelNest™基质胶最低浓度应不低于10mg/mL。



11.GelNest™基质胶的最低成胶浓度是多少?


不同的实验目的需要不同的GelNest™基质胶浓度,用户应该根据具体的实验需求确定。

GelNest™基质胶最低成胶浓度为7mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释,不同批次间的GelNest™基质胶浓度有差异,应该根据最终工作浓度(mg/mL)算出需要加入的稀释液体(如PBS或无血清培养基)的量。

用于体内研究的GelNest™基质胶,为了避免成胶不完全,最终工作浓度不应低于10mg/mL。



12.GelNest™基质胶胶块在体内可以维持多长时间?


基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。



13.怎样稀释GelNest™基质胶?


使用冰上预冷的无血清培养基或者PH=7.4的PBS。



14.应该如何对GelNest™基质胶移液操作?


推荐使用预冷的移液器或者注射器操作,移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部;分液时切忌过快、用力过猛。

如果使用移液管(Pipets),需要分液5mL时,应该吸取6mL,分液到移液管内仍有1mL时即停止;如果使用自动移液器(Pipetman),按压到第二档位吸液,然后按压到第一档位进行分液。



15.为什么我的GelNest™基质胶很粘稠?


基质胶的蛋白浓度越高,胶体越粘稠。如果浓度高于13.0mg/mL,基质胶会显得非常厚重。

GelNest™基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。粘稠的高浓度GelNest™基质胶不稀释也可以直接使用,如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子,注射于小鼠体内后,细胞可以保持原位,便于原位分析和/或以后的切除;或者稀释后,按照标准浓度的GelNest™基质胶产品使用方法使用,具体稀释浓度根据实验需求确定。

除因为产品本身浓度高而粘稠外,基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏GelNest™基质胶的冰箱带有自动除霜功能,冰箱除霜过程中升温,可能使基质胶成胶。所以,切忌将GelNest™基质胶储藏于此类冰箱中。

为保证GelNest™基质胶的使用效果,冻融次数应该尽可能减少。拿到新的GelNest™基质胶后,请按照单次用量进行分装。每次融化操作,GelNest™基质胶都应该放置于冰上。



16.为什么GelNest™基质胶在37°C成胶,而在4°C时却呈液体状态?


GelNest™基质胶是一种从小鼠肿瘤中提取的重组基底膜,新鲜提取的原料中主要包括以下成分:层粘连蛋白,IV型胶原,巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰岛素生长因子及其他生长因子。

这些蛋白构成了GelNest™基质胶的基本结构。在22℃-37℃温度条件下,大分子间的共价键可以结合,促使GelNest™基质胶形成凝胶。而在低温条件(如4℃)下,由于没有足够的能量促使共价键结合,所以GelNest™基质胶呈现液体状态。



17.GelNest™基质胶可以反复冻融吗?


建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装,保存。



18.为什么细胞没有贴壁?GelNest™基质胶也脱落了?


首先需要检查细胞的接种浓度是否过高,GelNest™基质胶的用量应等同于细胞培养体系中培养基的用量。如果GelNest™基质胶被稀释到过低的浓度,形成的胶体容易从组织培养器皿表面分离。



19.未稀释的GelNest™基质胶中出现的沉淀应该怎么样处理?


4℃下低速离心,去除沉淀物。



20.未使用完的GelNest™基质胶应该怎样保存的?


与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的GelNest™基质胶,不建议保留再用。



21.GelNest™基质胶可以储存在-70℃吗?


是的。GelNest™基质胶可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的GelNest™基质胶进行分装,储存于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中,方便保存和使用。



22.GelNest™基质胶会有自发荧光吗?


GelNest™基质胶是一种蛋白混合物,所以GelNest™基质胶可能引发荧光的组分为蛋白质成分。如果需要使用荧光检测细胞生长状态,建议使用者建立对照实验,在所需要的波长条件下进行对比,以便排除背景荧光。



23.使用GelNest™基质胶培养的细胞,如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验,该怎样固定呢?如何避免解聚?


可以使用2%浓度的多聚甲醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况,可以加入1%浓度的戊二醛。戊二醛作为固定剂,常用于电镜观察。

如果用户需要进行免疫荧光检验,加入戊二醛后,会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题,我们建议用户在固定之后,使用NaBH4进行淬灭。NaBH4极易产生气泡,进行该步骤时,必须在水平操作台上小心操作,避免晃动,尽量减少气泡的形成。另外,用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定,如0.1%到0.5%,浓度越低,背景荧光信号越少。



24.为什么GelNest™的颜色不一样?


因为二氧化碳和碳酸氢盐缓冲液及酚红的反应,冷冻或刚融解的GelNest™都有可能呈现不同颜色,颜色从稻草黄到暗红色不等。

酚红在冷冻或者酸性环境下呈现明黄色,在接近生理pH值或0ºC以上呈现红色。

GelNest™出现颜色上的区别是正常情况,不会影响产品质量,并且在和5%的二氧化碳平衡后,会恢复到统一颜色。






选购指南





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